組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Cephalin亞磷酸三苯酯 98%二乙烯苯 55%

TMEDA四氫糠 AR,98.0%乙基苯 >99.5%(GC)

TPT四氫糠 CP乙酸甲酯  ≥99%(GC)

p-Phenylenediamine四氫糠 99%甘氨酸 AR,99.5-100.5%

1，4-Phenylenediamine dihydrochloride四甲基溴化銨 AR三氯蔗糖  98%

Chloramine T trihydrate甲苯二異酸酯 98%（）烯酸叔丁酯 99%,含10-20 ppm MEHQ 作為穩(wěn)定劑

WSC甲苯二異酸酯 Standard for GC（）烯酸叔丁酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)

EDAC•HC1苯硫酚 99%（）1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯 99%

Phelphthalein mophosphate bis(cyclohexylammonium) salt四甲基溴化銨 離子對色譜級，≥99.0% (AT)N-(3-二甲氨基基)甲基烯酰胺 99%

 N-(1-Naphthyl)ethylenediamine四甲基溴化銨 ACS, ≥98.0%1,5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]-5-壬烯 98%

PHⅢ乙烷 99%,含銅屑穩(wěn)定劑烯酸異丁酯 99%

Benzamide三 AR,99.5%雞蛋白蛋白 98%

PEI1-烷 99%1,1-環(huán)己基二乙酸酐 98%

4-Methylaniline hydrochloride殼聚糖  脫乙酰度≥95%, ,粘度100-200 mpa.s乙酰酮鋇 Ba ≥30.0 %

Aniline hydrochloride羧化殼聚糖 BR,溶性硫柳汞鈉 AR,98%

Benzidine殼聚糖 低粘度：<200 mPa.s鈉 AR

甘油單油酸酯/單油酸甘油酯Prostate Specific Membrane Antigen (D7I8E) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗猴IgM

ADP.Na2; 5'-二磷酸腺苷二鈉/腺苷-5'-二磷酸二鈉鹽SSU72 (D3I2D) Rabbit mAbRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗猴IgM

ADP; 5'-二磷酸腺苷/腺苷-5'-二磷酸Phospho-CaMKK2 (Ser511) AntibodyRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗猴IgM

沙格列汀/沙克列汀TunicamycinRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗猴IgM

更昔洛韋BCAT1 AntibodyRabbit Anti-Mink IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗貂IgG

更昔洛韋(標(biāo)準(zhǔn)品)POLR3A (D5Y2D) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗貂IgG

5,6-二甲基-1-茚酮Vimentin (D21H3) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗貂IgG

芍藥苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的兔抗貂IgG

芍藥苷(40%)Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗貂IgG

芍藥苷(50%)PathScan® Total FGF Receptor 1 Sandwich ELISA KitRabbit Anti-Mink IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗貂IgG
肺孢子蟲通用PCR檢測試劑盒廠家人狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人癌標(biāo)志物-CA153ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃10毫克

人癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人癌易感蛋白2(BRCA-2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫克

人軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100克

人軟骨糖蛋白39(HCgp-39)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人腮腺炎病毒IgGELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克