注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
Streptokinase recombinantD-果糖-6-磷酸二鈉，二 98%印刷標(biāo)簽,用于100G(ML)包裝,尺寸:94mm*55mm

Phosphotransacetylase from Bacillus stearothermophilus鈣熒光探針FIuo,3-AM 70%印刷標(biāo)簽,用于500G(ML)及以上包裝,尺寸:   105mm*86mm

Casein熒蒽 分析標(biāo)準(zhǔn)品印刷標(biāo)簽,超大號(hào), 95mm*210mm

Casein Na saltD-半乳糖 分析標(biāo)準(zhǔn)品印刷標(biāo)簽,大號(hào),尺寸: 62mm*150mm

Heparin sodium salt羥基乙酰胺 98%印刷標(biāo)簽,中號(hào), 42mm*98mm

Heparin lithium三油酸甘油酯 99%印刷標(biāo)簽,小號(hào), 25mm*100mm

SPA戊二酰氯 97%印刷標(biāo)簽,超小號(hào),尺寸: 18mm*100mm

Collagen甘草次酸（α型） 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%21mm空白小標(biāo)簽 21mm

BSAN-(γ-L-谷氨酰）-1-萘胺 BR阿拉丁免檢小標(biāo)簽 125mm*32mm

OVAL-甘油酸鈣鹽，一 97%阿拉丁免檢大標(biāo)簽 160mm*60mm

HASDL-甘油 90%有此處開(kāi)封 標(biāo)簽 140*20mm

Avidin(chiken egg white)甘氨脫氧膽酸 97%內(nèi)有貨單此處開(kāi)封 標(biāo)簽 140*20mm

Streptavidin葡萄糖 standard for GC, ≥99.5% (GC)易碎物品 標(biāo)簽 150*120mm

Methyl albumin葡萄糖 分析標(biāo)準(zhǔn)品L-乳酸鈣 USP級(jí)

Hb胰高血糖素氫氯化物(人) ≥97.0% (HPLC)(-)-乳酸乙酯 98%

Hb羥基萘酚藍(lán) IND,94%(HPLC)(-)-乳酸乙酯 99%

硫酸鏈霉素IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat  干擾素-γ多肽抗原（大、小鼠）SKAR  DNA聚合酶δ相互作用蛋白3抗體

硫酸鏈霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)IFN- Gamma(Interferon Gamma)Human  干擾素-γ多肽抗原（人）SKALP/Elafin  彈性蛋白酶抑制劑抗體

硫酸雙氫鏈霉素IFN- Beta (Interferon Beta)Anti-mouse,rat  干擾素-β抗原SKA3  紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白3抗體

雙氯芬酸鈉IFN- Beta (Interferon Beta) human  干擾素-β抗原SKA2  紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白2抗體

雙氯芬酸鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）PSCA  前列腺干細(xì)胞抗原SKA1  紡錘體和著絲粒相關(guān)蛋白1抗體

加巴噴丁ADH/AVP peptide  抗利尿激素/血管升壓素抗原（和肽素）SISP1/GI24  應(yīng)激誘導(dǎo)分泌蛋白1抗體

加巴噴丁（標(biāo)準(zhǔn)品）PRRSV M protein  豬藍(lán)耳病病毒M蛋白SIRT7  沉默調(diào)節(jié)樣蛋白SirT7抗體

多潘立酮Newcastle disease virus/HRP  雞新城疫疫苗（雞瘟4型混合病毒）偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶SIRT6  沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體

多潘立酮（標(biāo)準(zhǔn)品）sIgA  大鼠分泌型IgA(抗原)SIRT5  沉默調(diào)節(jié)蛋白5抗體

帕潘立酮Melamine/KLH  三聚氰胺與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物SIRT4/SIR 2 like protein 4  沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白4抗體
羊口瘡病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃25毫克

人環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫升

人環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT支

人環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人環(huán)磷酰(CTX)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域(MLKL)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。