注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
猴25羥基維生素D3（25 HVD3）elisa試劑盒Anti-Epigen 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

倉鼠可溶性血管細(xì)胞粘附分子1（sVCAM-1）elisa試劑盒Anti-EPDR1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞骨架 細(xì)胞外基質(zhì)

人支氣管平滑肌細(xì)胞報(bào)價(jià)Anti-ESAM 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

801-D （人巨細(xì)胞性肺癌細(xì)胞）報(bào)價(jià)Anti-EMP3 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 表觀遺傳學(xué)

P3/NSI/1-Ag4-1 NS-1 （小鼠骨髓瘤細(xì)胞）價(jià)格Anti-EPHA10 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞類型標(biāo)志物

新生兒表皮角化細(xì)胞*培養(yǎng)基報(bào)價(jià)Anti-EV71 polyprotein 3D 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

小鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-EVC2 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) t-淋巴細(xì)胞 b-淋巴細(xì)胞

小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基報(bào)價(jià)Anti-Emerin 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

小鼠虹膜色素上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-ELF1/E74 like factor 1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

青霉素-鏈霉素溶液（100×）說明書Anti-Ephrin B3 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

連翹酯苷E93675-88-8實(shí)驗(yàn)方法Anti-EBAG9/RCAS1 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

氯化木蘭花堿6681-18-1*Anti-ELOVL6 研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué)

苯唑西林鈉使用說明書Anti-EphA6/Eph receptor A6 研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 表觀遺傳學(xué)

堿性蛋白酶價(jià)格Anti-EphA3/Eph receptor A3 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 結(jié)合蛋白 表觀遺傳學(xué)

2′-疊氮脫氧尿苷使用說明書Anti-EphA7/Eph receptor A7 研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 細(xì)胞骨架 細(xì)胞外基質(zhì)

巖白菜素VTG(vitellogenin)  青鳉魚卵黃蛋白 表皮生長因子受體IgG

鹽酸育亨賓Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(CT)  凋亡蛋白活性因子-1（抗原） 表皮生長因子受體IgG

野百合堿Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(NT)  凋亡蛋白活性因子-1（抗原） 表皮生長因子受體III型突變體IgG

銀杏內(nèi)酯AAR (Androgen Receptor)peptide  雄激素受體（多肽抗原） 熒光素PE標(biāo)記表皮生長因子受體IgG

異鉤藤堿5-HTR2A  5-羥色胺受體2A抗原 金標(biāo)記表皮生長因子受體IgG

銀杏內(nèi)酯Bthrombin/Prothrombin  凝血酶Ⅱ(凝血因子II)抗原 兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生長因子受體IgG

標(biāo)準(zhǔn)品5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a)  5-羥色胺受體3抗原抗體

葉酸5-HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4)  5-羥色胺受體4抗原 兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生長因子受體IgG

銀杏內(nèi)酯CMuc2 peptide  粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗原 真核翻譯起始因子3FIgG

鹽酸藥根堿ADAMTS7 peptide  整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗原 早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長基因1IgG
異源曼氏桿菌PCR檢測試劑盒說明書大鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

大鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

大鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100克

大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫克

大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1米

大鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃10克

大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。