注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
鏈霉素〖硫酸鹽〗保存Anti-Phospho MDM2 (S185) Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 信號轉導

氯化溶菌酶使用說明書Anti-Phospho MARK2 (T595) Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 信號轉導 生長因子和激素

氨肽酶抑制劑鹽酸鹽實驗步驟Anti-Phospho MEF2D (Ser444) Antibody研究領域 細菌及

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硫酸奎寧保存Anti-Phospho NCF4 (Thr154) Antibody研究領域 神經(jīng)生物學 信號轉導 表觀遺傳學

檸檬酸〖鋅〗實驗步驟Anti-Phospho MYL12A (S19/S20) Antibody研究領域 腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 信號轉導 轉錄調節(jié)因子 表觀遺傳學

N-乙酰-D-氨基葡萄糖使用說明書Anti-Phospho NCOA2 (Ser736) Antibody研究領域 細菌及

蔗糖價格Anti-Phospho NEK9 (Thr210) Antibody研究領域 細胞生物 神經(jīng)生物學

反玉米素使用說明書Anti-Phospho NF2 (Ser518) Antibody研究領域 腫瘤 免疫學

蛋白胨C價格Anti-Phospho NFAT5 (Ser1197) Antibody研究領域 心血管 細胞生物 信號轉導 細胞凋亡 表觀遺傳學

GAM瓊脂保存Anti-Phospho NIBAN2 (Ser679/683) Antibody研究領域 免疫學 染色質和核信號 轉錄調節(jié)因子 表觀遺傳學

柱式 DNA 膠回收試劑盒50 次品牌Anti-Phospho NIFK (Thr234) Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 激酶和磷酸酶

柱式探針純化試劑盒10 次品牌Anti-Phospho ODF2 (S796) Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 信號轉導 激酶和磷酸酶

鮭魚精 DNA 溶液1mL說明書Anti-Phospho PFKFB2 (Ser483) Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 信號轉導 激酶和磷酸酶

dCTP 溶液，2.5mM2mL品牌Anti-Phospho OXSR1 (Thr185) Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 染色質和核信號 轉錄調節(jié)因子

革蘭氏染色液Anti-ECM1   番茄紅素

十六烷基*基溴化銨培養(yǎng)基Anti-ED-1   番瀉苷B

乙酰胺培養(yǎng)基Anti-EGF-R   反式茴香腦

綠膿菌素測定培養(yǎng)基PDP基礎Anti-EGFR-ⅤⅢ  茯苓酸

甘油Anti-Egr-1   防己諾林堿

綠膿菌素測定用培養(yǎng)基PDP斜面限供汽運Anti-Emp1   佛手柑內酯

培養(yǎng)基anti-EMAb  標準品

明膠生化管Anti-Endostatin  扶桑甾

明膠培養(yǎng)基Anti-EpCAM  番瀉苷元A

硝酸鹽蛋白胨培養(yǎng)基Anti-EPEC-IgG O   番瀉苷元B
單純皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒價格組織磷脂酶B（Phospholipase B）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組織磷脂酶A2（Phospholipase A2）活性熒光定量elisa試劑盒    20次    *

組織磷脂酶A2（Phospholipase A2）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組織磷酸腺苷脫氨酶（AMPD）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組織磷酸葡萄糖異構酶（phosphoglucose isomerase；GPI）活性光譜法定量elisa試劑盒    20次    *

組織磷酸葡萄糖變位酶（phosphoglucomutase；PGM）活性光譜法定量elisa試劑盒    20次    *

組織磷酸甲戊二羥酸激酶（phosphomevalonate kinase）活性比色法定量elisa試劑盒    20次    *

組織磷酸果糖激酶（PHOSPHOFRUCTOKINASE）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量elisa試劑盒    20次    *
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。