注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
貂環(huán)磷酸腺苷（cAMP）elisa試劑盒Anti-DLEC1 Antibody研究領(lǐng)域  心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞粘附分子  

魚腎上腺髓質(zhì)素（ADM）elisa試劑盒Anti-DLG2 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 干細(xì)胞 合成與降解  

鯊魚睪酮（T）elisa試劑盒Anti-DLEU7 Antibody產(chǎn)品類型  一抗    

人心臟纖維原細(xì)胞價(jià)格Anti-DLGAP1 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)  

大鼠直腸平滑肌細(xì)胞價(jià)格Anti-DLGAP5 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物  

大鼠卵巢顆粒細(xì)胞說明書Anti-DLGAP5 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 細(xì)胞類型標(biāo)志物 新陳代謝 細(xì)胞膜蛋白  

大鼠卵巢成纖維細(xì)胞報(bào)價(jià)Anti-DLL4 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué)  

大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞報(bào)價(jià)Anti-DLX3 Antibody研究領(lǐng)域  心血管 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 生長因子和激素 糖尿病 新陳代謝  

大鼠心肌細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-DLK1 Antibody研究領(lǐng)域  心血管 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長因子和激素 脂蛋白 新陳代謝  

大鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞說明書Anti-DMAC2L Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 生長因子和激素 細(xì)胞周期蛋白 細(xì)胞分化 表觀遺傳學(xué)  

小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞價(jià)格Anti-DLX4 Antibody研究領(lǐng)域  發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白 細(xì)胞膜受體 G蛋白信號(hào)  

HUVEC（HUV-EC-C） （人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞）說明書Anti-DMC1 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞周期蛋白  

Chang liver （人張氏肝細(xì)胞）報(bào)價(jià)Anti-DMGDH Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡  

SK-MEL-1（人皮膚黑色素瘤細(xì)胞）說明書Anti-DMAP1 Antibody 研究領(lǐng)域  心血管 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)  

OKT 11（小鼠雜交瘤細(xì)胞（抗CD2））現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-DMGDH Antibody研究領(lǐng)域  心血管 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 內(nèi)分泌病  

3-羧基-5-硝基苯硼酸  4-甲基-5-(beta-)噻唑  (S)-2-乙氧基-3-{4-[2-(4-甲磺?；交?-乙氧基-苯基]-丙酸

鹽酸達(dá)泊西汀  4-異丙基苯甲  乙氧基甲叉基乙酸乙酯

1-甲基-3-*基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯  香茅  乙氧基甲叉二乙酯

硫代丙酸糠酯  茉莉油  2-乙氧基-5-

NA  質(zhì)鉀、鈉、鈣與混合標(biāo)樣

NA  質(zhì)鐵與錳混合標(biāo)樣

Octadecanethiol  正十八硫醇  2885-00-9

Total Cyanide Standard for water  質(zhì)總物標(biāo)樣

大鼠脂蛋白脂酶(LIPD)ELISA試劑盒 ，英文名： LIPD ELISA Kit

Wheat germ agglinin / agglination protein (WGA) ELISA Kit 麥胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA試劑盒

MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein2,IGFBP-2ELISAKIT 小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumangrowth-associatedprotein43,GAP-43ELISAKit人生長相關(guān)蛋白43規(guī)格：48T/96T

胃腸組織固著液(Hollande固著液)50毫升

ELISAKitbFGF-4大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4規(guī)格：48T/96T
蝦肝腸微胞蟲PCR檢測試劑盒廠家小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Ceruloplasmin,CP/CER ELISA Kit*

小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Hyaluronic acid,HA ELISA Kit進(jìn)口/分裝

小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse Hya]uronate binding protein,HABP ELISA Kit進(jìn)口/分裝

小鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse Melatonin,MT ELISA Kit進(jìn)口/分裝

小鼠脫氫表雄酮(DHEA)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Dehydroepiandrosterone,DHEA ELISA Kit*

小鼠脫氫表雄酮S7(DHEA-S7)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7 ELISA Kit進(jìn)口/原裝

小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse deoxypyridiline,DPD ELISA Kit進(jìn)口/原裝
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。