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腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書

產品簡介

腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書
上海聯(lián)祖生物相關產品:
IL-2R檢測試劑盒
用于鑒別綠膿桿菌產生綠膿菌素試驗,滅菌前培養(yǎng)基需加入10mL/L甘油(029080)。(GB)綠膿菌素測定用培養(yǎng)基(PDP)

更新時間:2021-03-14
訪問次數(shù):688
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產品名稱

 腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書

 英文名稱

 Adenoassociated Virus(AAV)PCR

 貨號

 LZP6343

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人肌腱蛋白R(TN-R)elisa試劑盒Anti-APLN Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學

人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa試劑盒Anti-APLP1 Antibody研究領域 腫瘤 心血管 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學

人黑色素瘤活性抑制蛋白(MIA)elisa試劑盒Anti-APLP2 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學

人果糖胺(FRA)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody研究領域 神經(jīng)生物學 信號轉導 細胞粘附分子 細胞外基質

人含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)elisa試劑盒Anti-APLP1 Antibody研究領域 神經(jīng)生物學 細胞粘附分子 細胞類型標志物

人分泌型卷曲相關蛋白2(SFRP2)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學

人肺炎衣原體抗原(Cpn)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody(原貨號PB0887)研究領域 細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學

人肺耐藥蛋白(LRP)elisa試劑盒Anti-APOB Antibody研究領域 神經(jīng)生物學 細胞粘附分子 細胞膜蛋白

人泛素結合酶E2D2(UBC4/5的同源物酵母)(UBE2D2)elisa試劑盒Anti-APOB Antibody(原貨號PB1096)研究領域 神經(jīng)生物學 信號轉導 細胞粘附分子

人多巴胺D1受體(D1R)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody(原貨號PB0888)研究領域 神經(jīng)生物學 信號轉導 細胞粘附分子 細胞膜蛋白

人對氧磷酶-3(PON3)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody(原貨號PB0963)研究領域 腫瘤 神經(jīng)生物學 信號轉導 細胞粘附分子 細胞外基質

人調寧蛋白-1(CNN1)elisa試劑盒Anti-APOBEC3A Antibody研究領域 神經(jīng)生物學 信號轉導 細胞粘附分子 細胞外基質

人凋亡相關蛋白激酶(DAPK)elisa試劑盒Anti-APOBEC3G Antibody研究領域 細胞生物 免疫學

人電壓門控鉀通道(VGKC)elisa試劑盒Anti-APOE Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學 細胞分化

人抵抗素(Resistin)elisa試劑盒Anti-APOD Antibody研究領域 細胞生物 免疫學

CDC厭氧菌瓊脂250g厭氧菌的分離培養(yǎng)

M-腸道菌瓊脂 M-Enterococcus Agar 水中或其它物質中腸球菌分離培養(yǎng)和計數(shù)(濾膜法或劃線法)

酸性肉湯 Acid Broth 250 酸性缺罐頭食品商業(yè)無菌檢驗(GB標準)

酵母基礎,無維生素250g/瓶通過維生素的利用對酵母菌進行分類incubationmedia酵母基礎,無維生素250g/瓶通過維生素的利用對酵母菌進行分類

NAMedium

抗生素7號培養(yǎng)基  Antibiotic Agar NO.7  250克  頭孢噻圬鈉等的效價測定

抗生素8號培養(yǎng)基  Antibiotic Agar NO.8  250克  去甲萬古霉素的效價測定

標準平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基  SPCA  250克  細菌總數(shù)的計數(shù)

平板計數(shù)瓊脂  PCA  250克  食品細菌總數(shù)測定和平板計數(shù)
腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書磷酸化肌醇聚磷酸鹽磷酸酶樣蛋白1抗體Vibralactone B中文名:韌革菌素B別名:分子式:C12H16O4

胰島素受體抗體Stachybotramide中文名:別名:分子式:C25H355

胰島素受體α抗體Bakkelide III中文名:別名:Fukilidiol分子式:C15H22O4

整合素α4抗體3-Epichromolaenide中文名:別名:3-Epihiyodorilactone B分子式:C22H28O7

整合素β3抗體Mollisorin A中文名:別名:分子式:C20H26O5
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

 

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